Дата подготовки материала: 00:00:23 ().
Стандарты серии ISO 21528 (а также их национальные аналоги – ДСТУ EN ISO 21528‑1:2022, ГОСТ ISO 21528‑1‑2020, ГОСТ 32064‑2013) регламентируют горизонтальные методы выявления и количественного определения бактерий семейства Enterobacteriaceae в пищевой продукции, кормах и окружающей среде. Эти документы являются основой для контроля санитарного качества продукции и выполнения требований технических регламентов Таможенного союза и ЕС.
История разработки стандарта
- Первая версия метода обнаружения Enterobacteriaceae была опубликована как ISO 21528‑1:2004.
- В 2017 г. стандарт был пересмотрен и опубликован как EN ISO 21528‑1:2017 (идентичный тексту ISO 21528‑1:2017).
- Национальная адаптация в Украине – ДСТУ EN ISO 21528‑1:2022 – вступила в силу с учётом актуальных требований к лабораторной практике.
- Метод подсчёта (колониальный счёт) описан в части 2: ISO 21528‑2:2004, позже подтверждённый как EN ISO 21528‑2:2017 и национальный аналог ГОСТ 32064‑2013.
Содержание частей стандарта
Часть 1 – Обнаружение Enterobacteriaceae (горизонтальный метод)
Цель части 1 – подтвердить наличие или отсутствиеEnterobacteriaceae в пробе без предварительного обогащения. Основные этапы:
- Подготовка пробы – гомогенизация вBuffered Peptone Water (BPW) или другом подходящем разбавителе.
- Инокуляция на селективный среды – обычно используют Violet Red Bile Glucose Agar (VRBGA) или аналогичные среды, подавляющие рост сопровождающей микрофлоры.
- Инкубация – при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 2 ч.
- Оценка результата – наличие характерных колоний (красные с жёлтым ободком) считается положительным результатом.
В национальном документе ДСТУ EN ISO 21528‑1:2022 уточнены требования к контролю качества среды, допустимым отклонениям в температуре инкубации и необходимости проведения подтверждающих тестов (например, тест на индуль, метиловый красный, цитрат).
Часть 2 – Колониальный метод подсчёта Enterobacteriaceae
Часть 2 предназначена для количественного определения (колониеобразующих единиц, КОЕ)Enterobacteriaceae в 1 г или 1 мл пробы. Ключевые моменты:
- Серийные разведения пробы в sterile diluent (обычно 0,1 % пептонной воды).
- Посев 0,1 мл каждого разведения на поверхностьVRBGA (или аналогичную среду) в дубликате.
- Инкубация – те же условия, что и в части 1.
- Подсчёт колоний – учитываются только типичные колонии; результат выражается как КОЕ/г (или КОЕ/мл) с учётом коэффициента разведения.
- Предел обнаружения – обычно 10 КОЕ/г при посеве 0,1 мл наименее разведённого образца.
Согласно ГОСТ 32064‑2013, метод части 2 является обязательным для продукции, подлежащей государственному надзору (мясо, молочная продукция, консервы, детское питание).
Сравнение национальных и международных версий
| Параметр | ISO 21528‑1/2 | ДСТУ EN ISO 21528‑1:2022 | ГОСТ ISO 21528‑1‑2020 | ГОСТ 32064‑2013 |
|---|---|---|---|---|
| Год принятия | 2017 (ISO) | 2022 | 2020 | 2013 |
| Объём пробы для обнаружения | 25 г (или 25 мл) | 25 г | 25 г | 25 г |
| Среда для обнаружения | VRBGA | VRBGA (или Hektoen enteric agar) | VRBGA | VRBGA |
| Температура инкубации | 36 ± 2 °C | 36 ± 2 °C | 36 ± 2 °C | 36 ± 2 °C |
| Продолжительность инкубации | 24 ± 2 ч | 24 ± 2 ч | 24 ± 2 ч | 24 ± 2 ч |
| Метод подсчёта | Колониальный счёт на VRBGA | Колониальный счёт на VRBGA | Колониальный счёт на VRBGA | Колониальный счёт на VRBGA |
Как видно из таблицы, национальные стандарты полностью соответствуют международным требованиям, добавляя лишь уточнения по контролю качества реагентов и документации.
Практическое применение в пищевой индустрии
Методы ISO 21528 находят широкое применение:
- Контроль сырья (мясо, птицу, рыбу) на этапе приёмки.
- Мониторинг готового продукта (колбасы, консервы, молочные десерты).
- Оценка санитарного состояния производственного оборудования и окружающей среды (мазки с поверхностей, воды для мойки).
- Подготовка документации для сертификации по системам HACCP, ISO 22000, BRCGS и др.
Пример типового протокола испытаний:
- Взятие репрезентативной пробы (минимум 25 г).
- Гомогенизация в 225 мл BPW (1:10 разведение).
- Для обнаружения – посев 1 мл гомогената на VRBGA, инкубация 24 ч.
- Для подсчёта – приготовление серийных разведений (10⁻¹–10⁻�), посев 0,1 мл каждого разведения в дубликате, инкубация, подсчёт колоний.
- Расчёт результата и сравнение с предельно допустимыми уровнями (ПДУ) согласно техническому регламенту.
Преимущества и ограничения метода
Преимущества
- Простота и доступность – требуется только стандартная микробиологическая лаборатория.
- Высокая специфичность благодаря использованию селективных сред.
- Возможность как качественного, так и количественного определения.
- Международное признание – результаты сопоставимы между лабораториями разных стран.
Ограничения
- Метод не различает виды внутри семейства Enterobacteriaceae (для идентификации необходимы дополнительные биохимические или молекулярные тесты).
- При высоком фоновом загрязнении другими микроорганизмами может потребоваться предварительное обогащение (что выходит за рамки горизонтального метода).
- Требуется строгое соблюдение условий инкубации; отклонения могут привести к ложноотрицательным результатам.
Серия стандартов ISO 21528 (включая национальные адаптации ДСТУ EN ISO 21528‑1:2022, ГОСТ ISO 21528‑1‑2020 и ГОСТ 32064‑2013) представляет собой надёжный и universally accepted инструмент для обнаружения и подсчёта Enterobacteriaceae в пищевой продукции и кормах. Соблюдение предписанных процедур обеспечивает достоверность результатов, что критически важно для защиты здоровья потребителей и выполнения регуляторных требований. Рекомендуется регулярно проводить внутренние аудиты лабораторной практики, участвовать в межлабораторных сравнительных испытаниях (PT) и обновлять методические указания в соответствии с последними пересмотрами ISO и национальными органами по стандартизации.
Статья подготовлена на основе информации из открытых источников, актуальной на .